ارزیابی ایمونولوژیکی پلاسمید حاوی ژن کد کننده eg95 ایزوله ایرانی اکینوکوکوس گرانولوزوس در موش balb/c

اکینوکوکوس گرانولوزوس echinococcus granulosus سستود انگلی می باشد که باعث ایجاد بیماری کیست هیداتید در انسانها در سراسر دنیا می شود. ایران یکی از مناطق اندمیک عفونت در دنیا بوده، که این مسئله بیانگر اهمیت و حضور بیماری در این کشور می باشد. واکسیناسیون به عنوان یکی از راههای پیشگیری مورد استفاده قرار می گیرد و ژن کد کننده پروتئین eg95 می تواند به عنوان یک هدف مناسب جهت ساخت واکسن dna برای پیشگیری از این بیماری باشد. هدف از انجام این پژوهش کلونینگ ژن کد کننده پروتئین eg95 در وکتور بیانی pcdna3 و سپس استفاده از این پلاسمید نوترکیب به عنوان واکسن dna در موش balb/c و ارزیابی ایمونولوژیکی این واکسن نوترکیب در موش بود. در این تحقیق پس از استخراج rna total از پروتواسکولکس انگل و تبدیل آن به cdna، در طی واکنش rt-pcr ژن کد کننده پروتئین eg95 تکثیر شده و محصول pcr در ptz57r/t کلون گردیده و سپس تعیین توالی شد. نتایج نشان داد که که قطعه ای bp492در پلاسمید مذکور کلون شده و قطعه کلون شده ژن eg95 انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس است. سپس این ژن در pcdna3 ساب کلون گردیده و بعد از ترانسفکت کردن این پلاسمید نویرکیب در سلول یوکاریوتیک(cho) بیان این ژن به روشsds-page و western blot تایید شد. در این مطالعه به منظور بررسی پاسخهای ایمنی هومورال و سلولی 90 موش balb/c ماده in bred با پلاسمید حاوی این ژن ایمن سازی شدند . ایمونیزاسیون 3 بار به فواصل 3 هفته ای انجام شد . نتایج بدست آمده نشان داد که در ایمنی همورال با اندازه گیری igg total و اندازه گیری ایزوتایپ igg2a و igg1 اختلاف معنی دار را بین گروههای مورد و کنترل وجود ندارد(p?0.05). اندازه گیری ifn-? نشان دهنده مقادیر بالایی از این سایتوکائین بوده ولی اندازه گیری il4 نشان دهنده مقدار پایین این سایتوکائین است. در بررسی میزان رشد کیست در بدن موشها مشاهده شد گروههایی از موشها که واکسن نوترکیب pceg95 را همراه با دو ادجوانت pcil-12 و mmt دریافت کرده بودند، تعداد و اندازه کیست در آنها کمتر از سایر گروهها بود. با توجه به نتایج، واکسن dna حاوی ژن eg95 قادر به ایجاد حفاظت کامل بر علیه تشکیل کیست هیداتید نمی باشد. همچنین یافته های این مطالعه نشان داد که استفاده از آدجوانت های pcil-12 و mmt همراه با واکسن dna حاوی ژن eg95 تغییر معنی داری در پاسخهای ایمنی سلولی ایجاد می کند.